背景:

中国药典2015版中仅提出隔离系统除菌验证的标准为“用于隔离器、实验物品的灭菌方法应能达到或超过使生物指示剂下降6个对数值的效果”，但并未给出具体的除菌参数及验证方法。其根本原因在于隔离器的除菌效果受到多种因素的影响，比如气体发生器，隔离器腔体结构、除菌气体类型、除菌时间、除菌浓度、对应的温湿度、压力等，即使是同一批次生产的隔离器，气体发生器也是有所不同。PIC/S Isolators used for aseptic processing and sterility testing中指出在无法证明气体发生器的气体除菌过程是相同的情况下，则要求将气体发生器当成不同的设备对待，也就是说每1台隔离器应该进行单独的除菌循环开发及验证。

隔离器除菌循环开发目的在于确定隔离器日常除菌程序中所必需的过程控制参数。开发测试项目至少包括以下几个方面，隔离器中除菌试剂的分布以及除菌时间和除菌程序完成以后的除菌试剂排空时间。

测试原理:

除菌循环开发：

1.气体分布性：在隔离器内布置化学指示剂，尤其注意部分依靠气体被动扩散的区域或者容易被遮挡的区域，用于检测除菌气体的分布性。

2.隔离器除菌参数确定：在除菌气体分布最差的位置进行生物指示计布点。设置合适的除菌浓度、温度、湿度，过长的除菌时间等除菌参数，采用部分阴性法或存活曲线法测定生物指示剂在该条件下的D值。则空载情况下隔离器的最终除菌时间=6倍*生物指示剂的D值*保险系数S_空，S_空大于1.0.满载情况下，隔离器的最终除菌时间=6倍*生物指示剂的D值*保险系数S_满，S_满大于S_空。该除菌时间最终还需要通过除菌验证，否则需调整保险系数。

3. 通风排残时间确定：通风后应保证浓度低于职业接触限值，可用电化学传感器或化学指示剂检测。

除菌验证：

运行一个灭菌循环，以确认灭菌循环各阶段实际运行值与其设定值是否相符。根据隔离器的内腔容积进行生物指示计布点，布点原则为5个/m³，最少布5个点，均匀分布于内表面，尤其在气体除菌剂分布较低的位置。启动隔离器，先对腔体内部进行除湿和汽化单元进行预热，按照除菌运行参数运行，最后进行通风排残。灭菌结束后取出测试样本，均放到相应培养基中，在合适条件下培养，观察微生物生长结果。未经过灭菌周期的生物指示剂同条件下培养作为阳性对照。将不含生物指示剂的TSB培养物作为阴性对照同条件培养。所采用的灭菌参数及循环程序应能使隔离器内表面或无菌器具暴露的外表面上高耐受性的生物指示剂下降6个对数单位，并具有重现性。隔离器内物品和设备满载时需要用更多的生物指示剂进行试验。

方法参考:

<中国药典>2015版  9206无菌检查用隔离系统验证指导原则

<中国药典>2015版 通则 1421

PIC/S Isolators used for aseptic processing and sterility testing

USP<1208>Sterility Testing-Validation of Isolator System/General informance

PDA TR34 Design and Validation of Isolator Systems for the manufacturing and testing of Health care Products.

JB/T 20175-2017 无菌隔离器

样品要求:

除菌循环开发及验证：现场或隔离器寄送