背景:

微生物挑战试验是无菌生产工艺验证的重要环节，而选择适当的生物指示剂(BI)则是微生物挑战试验结果获得认可的关键。BI可用于验证和监测蒸汽，环氧乙烷和过氧化氢灭菌循环。GMP中规定在使用前要对BI进行微生物数量的确认，因此应当检测每批生物指示剂中的微生物孢子数。

为了表征菌株的抗力，可参照USP <55>和ISO 11138-1:2017的相关标准化程序或生产商说明书，测定D值、存活时间和杀灭时间，并提交相关的验证资料。

测试原理:

活孢子计数：枯草芽孢杆菌，短小芽孢杆菌或嗜热脂肪芽孢杆菌的活孢子用于验证灭菌周期。对载体上的芽孢杆菌进行计数，以判断是否符合生产商的要求。通过洗脱，连续稀释和倾注平板法进行培养计数。

BI评估（D值）可通过将样本在灭菌装置中暴露不同的时间，然后将芽孢条转移至无菌肉汤中，或自含式指示剂用自带的夹子夹破内部玻璃管后培养，记录未长菌的样本数，按ISO 11138-1中LSKP方法公式计算D值。

方法参考:

<中国药典>2015版 通则 1421

USP <55> Biological Indicators-Resistance Performance Tests

ISO 11138-1:2006 Sterilisation of Healthcare Products -Biological Indicators - Part 1: General Requirements.

样品要求:

计数：6份BI

BI评估:根据方案制定数量

试验内容	预计耗时
孢子计数	3天
BI评估(D值)	7天（或根据生产商说明书）